缺氧预处理通过激活MALAT1靶向抑制miR-195促进骨髓间充质干细胞的生存和血管形成

文题释义：

长链非编码RNA-MALAT1：MALAT1促进骨髓间充质干细胞生存和血管形成，其受缺氧因素的调控，在缺氧条件下表达上调。研究显示MALAT1能够通过竞争性内源性RNA调控微小RNA(miRNA)的表达，进而影响骨髓间充质干细胞的生物学行为。

微小RNA-195(miR-195)：miRNA与骨髓间充质干细胞生存和血管形成密切相关。miR-195被证实是骨髓间充质干细胞生存和血管形成的一个负向调控因子，它能够促进骨髓间充质干细胞的衰老，削弱其生存和抗凋亡能力，并对血管形成具有抑制作用。

背景：研究表明，缺氧预处理能够促进骨髓间充质干细胞生存和血管形成，但具体机制未完全明确。长链非编码RNA-MALAT1(MALAT1)和microRNA-195(miR-195)均被证实与骨髓间充质干细胞生存和血管形成密切相关，MALAT1促进骨髓间充质干细胞生存和血管形成，而miR-195是骨髓间充质干细胞生存和血管形成的负向调节因子。

目的：体外探讨缺氧预处理是否通过激活MALAT1靶向抑制miR-195进而提高骨髓间充质干细胞生存和促血管形成能力。

方法：将体外培养的骨髓间充质干细胞分为以下6组：常氧组(体积分数为20%O2)、缺氧组(体积分数为1%O2)、缺氧+si-MALAT1组、缺氧+

si-MALAT1对照组、缺氧+miR-195组和缺氧+miR-195对照组，其中缺氧+si-MALAT1组和缺氧+si-MALAT1对照组细胞分别转染MALAT1siRNA以及scramble阴性对照，再进行缺氧处理，缺氧+miR-195组和缺氧+miR-195对照组细胞分别转染miR-195模拟物及阴性对照，再进行缺氧处理。各组培养24h后检测细胞增殖、凋亡以及血管腔样结构形成情况，qRT-PCR检测MALAT1和miR-195的表达。在上述基础上，通过生物信息学网站RegRNA2.0预测MALAT1与miR-195的潜在结合位点，将MALAT1野生型和突变型质粒分别与miR-195模拟物以及阴性对照在293T细胞中共转染，通过检测各组萤光素酶活性对MALAT1与miR-195的靶向关系进行验证。

结果与结论：①与常氧组相比，缺氧组细胞生存力显著增强，凋亡率明显减少，血管腔样结构数量增多(P<0.01)，MALAT1表达升高，miR-195表达降低(P<0.01)；②与缺氧组和缺氧+si-MALAT1对照组比较，缺氧+si-MALAT1组细胞生存力显著降低，凋亡率明显增加，血管腔样结构数量减少(P<0.01)，MALAT1表达下降，miR-195表达升高(P<0.01)；与缺氧组和缺氧+miR-195对照组比较，缺氧+miR-195组细胞生存力显著降低，凋亡率明显增加，血管腔样结构数量减少(P<0.01)，MALAT1表达明显下降，miR-195表达升高(P<0.01)；③双萤光素酶检测结果显示：与miR-195对照组和空白对照组相比，miR-195组MALAT1野生型报告基因的萤光素酶活性显著降低，下降约63%(P<0.01)，而miR-195组、miR-195对照组以及空白对照组的萤光素酶活性在MALAT1突变型中均无明显差异性(P>0.05)；④结果表明，缺氧预处理能够通过激活MALAT1靶向抑制miR-195提高骨髓间充质干细胞的生存和促血管形成能力。

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